多肽是由許多氨基酸組成的蛋白質(zhì)元素,是生命體中最重要的基礎(chǔ)元素之一。由于其在藥物領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用,多肽的合成技術(shù)也越來越受到人們的重視。
一、多肽合成的方法
多肽合成的方法主要分為兩類化學(xué)方法和生物方法。
1. 化學(xué)法
化學(xué)方法是將小分子氨基酸逐步反應(yīng)合成大分子的多肽。其中,Fmoc固相合成法和Boc固相合成法是較為常見的合成方法。
Fmoc固相合成法是指使用氟代甲酸酯(Fmoc)作為氨基酸N端的保護(hù)基,通過串聯(lián)反應(yīng)的方式將氨基酸依次加入到多肽鏈中。然后,通過去保護(hù)等一系列步驟,合成出多肽。
Boc固相合成法則是使用叔丁氧羰基(Boc)作為氨基酸N端的保護(hù)基,同樣通過串聯(lián)反應(yīng)的方式將氨基酸逐一加入到多肽鏈中,然后通過去保護(hù)等一系列步驟完成合成。
2. 生物法
生物法是利用生物技術(shù)手段,如基因重組技術(shù)、發(fā)酵技術(shù)等方法合成多肽。生物法中的合成分為兩個(gè)階段,即:基因改造(轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒)和發(fā)酵合成。
基因改造是將多肽基因浸入適合的宿主細(xì)胞中并轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒,通過調(diào)控表達(dá)系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)多肽的高效表達(dá)。而發(fā)酵合成則是利用在發(fā)酵容器中大量培養(yǎng)這些重組菌株,以生產(chǎn)大量的多肽。
二、多肽合成的設(shè)備
多肽合成設(shè)備主要分為兩個(gè)方面:實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和工業(yè)化設(shè)備。
1. 實(shí)驗(yàn)室設(shè)備
在實(shí)驗(yàn)室中,多肽合成設(shè)備包括:多肽合成儀、反應(yīng)器、液體自動(dòng)加藥儀、高效液相色譜儀、氣相色譜儀等。
多肽合成儀通常由氨基酸負(fù)載樹脂、溶液加注系統(tǒng)、反應(yīng)室、旋轉(zhuǎn)式混合器、反應(yīng)器、生物產(chǎn)物中間收集系統(tǒng)等組成。其中,氨基酸負(fù)載樹脂和反應(yīng)室是最重要的組成部分,直接影響多肽合成反應(yīng)的效率和質(zhì)量。液體自動(dòng)加藥儀可自動(dòng)控制反應(yīng)過程中藥液的控制,提高反應(yīng)的精度和效率。高效液相色譜儀和氣相色譜儀通常用于分析還原劑、氨基酸序列、殘基組成、多肽半透明含量等。
2. 工業(yè)化設(shè)備
在工業(yè)化生產(chǎn)環(huán)節(jié),多肽合成設(shè)備通常包括:發(fā)酵罐、曝氣設(shè)備、分離設(shè)備、膜分離設(shè)備、凝膠透析設(shè)備等。
發(fā)酵罐是多肽合成的核心設(shè)備,通常由發(fā)酵罐外殼、攪拌器、進(jìn)料管道、曝氣裝置和溫度控制裝置等組成。曝氣設(shè)備是將致密液體中的氣泡拆散并輸送到有機(jī)質(zhì)中,從而增強(qiáng)氣體和液體的接觸面積。分離設(shè)備主要包括沉淀離心、壓濾、膜過濾等,用于多肽的分離、洗滌。膜分離設(shè)備常用于分離多肽產(chǎn)物和預(yù)處理客戶端物質(zhì)。凝膠透析設(shè)備則主要用于多肽對大分子物質(zhì)的透析和清洗。
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